Kommissarin Lena Odenthal bekommt Besuch von ihrer Tante Niki, einer pensionierten Staatsanwältin. Gleichzeitig sind Lena und Johanna Stern mit dem Tod eines Altenheimbewohners beschäftigt, der durch eine Überdosis Insulin getötet wurde.

Lena Odenthal muss Beruf und Familie unter einen Hut bringen: Ihre Tante Niki, pensionierte Staatsanwältin, scharfzüngig und durchsetzungsfähig, trifft zu einem Besuch in Ludwigshafen ein. Gleichzeitig sind Lena und Johanna Stern mit dem Tod eines Altenheimbewohners beschäftigt, der durch eine Überdosis Insulin getötet wurde. Herr Herrweg war über 90, zu erben gibt es höchstens Verpflichtungen – wer hatte ein Motiv, ihn umzubringen? Die Kommissarinnen durchleuchten die Heimbewohner wie auch die Vergangenheit des Opfers. Während Johanna es begrüßen würde, wenn der sympathische Hausarzt des Seniorenheims nicht in den Fall verwickelt wäre, hat Lena merkwürdigerweise immer wieder den Eindruck, dass Niki sich heimlich ebenfalls mit den Ermittlungen beschäftigt. Das Interesse ihrer Tante an der Vergangenheit des Toten scheint mehr als nur familiäre Zugewandtheit oder fachliches Interesse. Den Gedanken, dass ihre Tante in den Fall verwickelt sein könnte, schiebt Lena trotzdem von sich. Aber der Fall Herrweg führt die Kommissarinnen in die Untiefen deutscher Geschichte, und damit hat gerade Niki viel Erfahrung. Das Drehbuch zum „Tatort: Lenas Tante“ schrieb der mit den Lena-Odenthal-Tatorten eng verbundene Autor Stefan Dähnert, inszeniert wurde der Film von Tom Lass in seiner ersten Regie für die "Tatort"-Reihe. Sie beginnen ihre Erzählung rund um die Beziehung von Nichte und Tante in leichtem Ton, der unmerklich ernster wird, je weiter sich die Kommissarinnen und parallel die ehemalige Staatsanwältin in die Vergangenheit des Opfers und der Verdächtigen eingraben. Ursula Werner spielt Niki Odenthal und lässt dabei deutlich werden, wo Lena ihre berufliche Hingabe und Hartnäckigkeit mitbekommen haben könnte.