Der erfolgreichen aber unorthodoxe Detective Jake Peralta (Andy Samberg) und der streng nach Vorschrift arbeitende neue Captain des Reviers, Ray Holt (Andre Braugher), sind widerstrebend zur Zusammenarbeit gezwungen. Der anfangs als verbissener Kleinkrieg geführte Konflikt der beiden endet schließlich in einem Waffenstillstand, als Peralta erkennt, dass sein Vorgesetzter ein Vorreiter unter den homosexuellen Polizisten New Yorks ist, der sich gegen viele Widerstände seinen Rang hart erarbeitet hat und dass jeder öffentlich werdende Streich Peraltas nicht nur Captain Hold, sondern auch einer ganzen Gruppe von geschätzten Kollegen Ungemach bereiten würde.Intern zankt sich Peralta mit der ebenfalls erfolgreichen aber sehr streberhaften Kollegin Amy Santiago (Melissa Fumero). Weitere Detectives sind die taffe Rosa Diaz (Stephanie Beatriz), die alles mädchenhafte und gefühlsduselige ablehnt; Peraltas "Juniorpartner" Charles Boyle (Joe Lo Truglio), der zu Ungeschicklichkeit neigt und Peralta vergöttert; sowie das aus den beiden vollkommen unfähigen Cops bestehende Team Hitchcock (Dirk Blocker) und Scully (Joel McKinnon Miller). Zwischen den Detectives und dem Captain steht der kraftvolle aber auch sensible Detective Sergeant Terence "Terry" Jeffords (Ex-Footballer Terry Crews), ein zweifacher Vater. Das Revier wird komplettiert von der Verwaltungsangestellten Regina "Gina" Linetti (Chelsea Peretti), die von sich selbst sehr überzeugt ist.

Der Alltag auf dem 99. Revier ist alles andere als Routine: Dafür sorgen die ambitionierten - aber charakterlich vollkommen unterschiedlichen - Detectives. Allen voran steht Jake Peralta, der mit seiner albernen Art die Fälle gerne auf seine Art löst. Dem neuen Polizeichef, dem disziplinierten Captain Ray Holt, ist er jedoch ein Dorn im Auge. Der hat nämlich große Pläne: Er möchte die Einheit zur Besten in ganz Brooklyn machen.